SweAgrose Protein G -vasta-ainepuhdistettu agaroosi

 

Tuotteen nimi	Kissa. Ei.	Spec.
SweAgrose Protein G -vasta-aine Puhdistettu agaroosi	G2207-1ML	1 ml
	G2207-5ML	5 ml

 

 

Proteiini A on Staphylococcus aureuksesta löydetty soluseinän pintaproteiini, jonka molekyylipaino on 42 kDa. Proteiini G on immunoglobuliinia sitova proteiini, jota ekspressoivat streptokokkibakteerit (C tai G). Proteiini A ja Proteiini G ovat toiminnallisesti samanlaisia ​​ja voivat sitoutua spesifisesti nisäkkään immunoglobuliiniin (Ig). Rekombinanttiproteiini A ja G sopivalla agaroosiin sitoutuneella modifikaatiolla voidaan käyttää immunosaostukseen tai vasta-aineen puhdistamiseen. Proteiini A-agaroosi soveltuu sitomaan ihmisen IgG1:tä, IgG2:ta, IgG4:ää, hiiren IgG2a:ta, IgG2b:tä, kun taas Proteiini G -agaroosi soveltuu sitomaan ihmisen IgG1:tä, IgG2:ta, IgG3:a, IgG4:ää, hiiren IgG1:tä, IgG2a:ta, IgG2b:tä, rotan IgG1:tä, IgG2a:ta, IgG2a IgG2b, IgG2c ja muut polyklonaaliset vasta-aineet. (Katso tarkempia tietoja taulukosta I)

Tämä tuote käyttää itse kehitettyä ja tuotettua Protein G -leimattua agaroosia, verrattuna vastaaviin markkinoilla oleviin tuotteisiin, tämä tuote sitoo vasta-aineita tehokkaammin ja sillä on pienempi epäspesifinen sitoutumisnopeus, yhdessä optimoidun puskurin kanssa, se voi olla kätevä ja tehokas immunosaostuskokeita varten; sitä voidaan käyttää laajasti kohdeproteiinien eristämiseen ja puhdistamiseen näytteistä, kuten solulysaateista, soluerityksen supernatanteista, seerumista, askitesista jne.

 

 

Ominaisuudet	Kuvaus
Tuotteen sisältö	50 % (v/v) agaroosi spesifisessä suojapuskurissa
Helmien rakenne	6 % silloitettua agaroosia
Yhdistetty proteiini	Proteiini G
MWof-proteiini	~25 kDa (proteiini G)
Sitoutumiskyky	>1 mg hiiren vasta-ainetta per millilitra helmiä
Spesifisyys	Vasta-aineita eri lajeista, mukaan lukien hiiret, ihmiset, rotat, vuohet, lampaat ja naudat
Helmien koko	30~150 μm
Eluointimenetelmä	Eluointi hapolla tai 1x SDS-PAGE-latauspuskurilla (vähennetty) Huomautus: Jos eluoidaan 1x SDS-PAGE-latauspuskurilla (vähennetty), vasta-aineen raskas ketju (~ 50 kDa) ja kevyt ketju (~ 25 kDa) denaturoituvat ja vapautuvat agaroosihelmistä.
Sovellus	IP, Co-IP, proteiinin puhdistus

 

 

Laiva märällä jäällä; Säilytä 2-8 asteessa, voimassa 12 kuukautta.

 

 

Komponentin numero	Komponentti	G2207-1ML	G2207-5ML
G2207	SweAgrose Protein G -vasta-aine Puhdistettu agaroosi	1 ml	5 ml
Manuaalinen		1 kpl

 

 

Vasta-aineiden puhdistukseen liittyvät reagenssiformulaatiot viittaavat seuraaviin, käyttäjää voidaan säätää tiettyjen koeolosuhteiden mukaan.

Komponentti	Reagenssiyhdistelmä
Sitova pesupuskuri	PBST: 137 mM NaCl, 2,7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2.0 mM KH2PO4, 0,1 % Tween-20
Eluointipuskuri	100 mM Gly, 0,1 % Tween-20, pH 2,5
Neutralointipuskuri	1.0 M Tris-HCl, pH 9.0
Säilytyspuskuri	PBST, 0,1 % (v/v) Proclin 300

 

Manuaalinen toimenpide (esimerkiksi hiiren askites IgG:n puhdistus)

1. Näytteen käsittely: ota 500 µl askitesnäytettä, lisää sitovaa pesupuskuria saadaksesi 500 µl, jos näytteessä on enemmän proteiinisaostumia, sentrifugoi supernatantti kokeita varten, mikä voi parantaa vasta-aineen puhtautta.

2. Agaroosin esikäsittely: Vorteksoi vasta-ainepuhdistettua agaroosia 30 sekuntia, jotta se suspensoituu riittävästi, ota 100 μl 50 % (v/v) SweAgarose Protein G -vasta-aine Puhdistettua agaroosia toiseen uuteen 1,5 ml:n EP-putkeen, sentrifugoi 6 °C:ssa,{{7} } xg 30 s 4 asteessa ja hävitä supernatantti, pese se 1 ml:lla sitovaa pesupuskuria kahdesti ja ota sitten supernatantti magneettisen aspiraation jälkeen.

Huomautus: Agaroosin määrää voidaan säätää näytteessä olevan vasta-aineen määrän mukaan.

3. Vasta-aineen adsorptio: lisää vaiheessa 1 käsitelty näyte vaiheessa 2 olevaan agaroosiin, vorteksoi ja sekoita hyvin, aseta EP-putki pyörivään sekoittimeen tai käännä putkea käsin varovasti huoneenlämpötilassa (noin 25 astetta) agaroosin valmistamiseksi. täydellinen kosketus näytteen kanssa, käännä se ympäri 15 minuuttia, sentrifugoi 6, 000 xg 30 s 4 asteessa ja sitten hävitä supernatantti.

4. Agaroosipesu: lisää 1 ml sitovaa pesupuskuria EP-putkeen, suspendoi uudelleen ravistaen ja sentrifugoi sitten 6,000 xg 30 s 4 asteessa. Hävitä supernatantti ja toista toimenpide 3 kertaa.

5. Vasta-aineeluointi: Lisää 0,5~1.0 ml eluenttia EP-putkiin, joissa agaroosi on pesty edellä kuvatulla tavalla, ja suspensoi putket nopeasti pipetillä tai vorteksoimalla ja käännä sitten varovasti putket pyörivässä sekoittimessa tai käsin huoneenlämmössä (noin 25 astetta), sentrifugoi 6, 000 xg 30 s 4 astetta 10 minuutin kääntämisen jälkeen ja kerää sitten supernatantti uusiin EP-putkiin.

6. Vasta-aineen neutralointi: lisää vasta-aineeluaattiin tietty määrä neutralointiliuosta vaiheessa 5, yleensä 1/10 vasta-aineen eluointitilavuudesta (esim. jos vasta-aineeluaatti on 500 μL, lisätyn neutralointiliuoksen määrä on 50 μL) , jotta eluoidun vasta-aineen pH-arvo säilyy neutraalissa ympäristössä, mikä edistää vasta-aineen biologisen aktiivisuuden ylläpitämistä ja vältettävää vasta-ainetta inaktivointi.

7. Agaroosin jälkikäsittely: Pese agaroosi kahdesti eluointiliuoksella käytön jälkeen, sentrifugoi 6, 000 xg 30 s 4 asteessa ja hävitä supernatantti; pese sitten kolme kertaa sitovalla pesuliuoksella, sentrifugoi nopeudella 6, 000 xg 30 s 4 asteessa ja hävitä supernatantti; suspensoi agaroosi uudelleen 200 µl:aan säilöntäliuosta ja säilytä sitten 2-8 asteessa.

 

 

1. Lue nämä ohjeet huolellisesti ennen kuin jatkat vasta-aineiden puhdistamista.

2. Älä jäädytä tai sentrifugoi agaroosia, koska tämä voi aiheuttaa agaroosin peruuttamatonta kasaantumista.

 

Taulukko 1

Laji	Ig	Proteiini A	Proteiini G	Yhteensä Ig	Proteiini A	Proteiini G
Ihmisen	IgG1	++++	++++	Ihmisen	++++	++++
	IgG2	++++	++++	Hiiri	+++	+++
	IgG3	-	++++	Rotta	+/-	++
	IgG4	++++	++++	Kani	++++	+++
	IgA	++	-	Vuohi	-	++
	IgD	++	-	Kana	-	+
	IgE	++	-	Lehmä	++	++++
	IgM	++	-	Marsu	++++	++
Hiiri	IgG1	+	++++	Hamsteri	+	++
	IgG2a	++++	++++	Hevonen	++	++++
	IgG2b	+++	+++	Sika	+++	+++
	IgG3	++	+++	lampaat	+/-	++
	IgM	+/-	-	++++: Vahva Bing
Rotta	IgG1	-	+	++~+++: Keskitasoinen sidonta
	IgG2a	-	++++	+:Heikko sidonta
	IgG2b	-	++	+/-:Heikko tai ei sitovaa
	IgG2c	+	++	-: Ei sidontaa
	IgM	+/-	-

 

Vain tutkimuskäyttöön. Ei käytettäväksi diagnostisissa tai terapeuttisissa toimenpiteissä!

 

 

Suositut Tagit: sweagrose proteiini g vasta-aine puhdistettu agaroosi, Kiina sweagrose proteiini g vasta-aine puhdistettu agaroosi valmistajat, toimittajat, tehdas