Gram-värjäyssarjat

Gramvärjäys on mikrobiologiassa laajalti käytetty differentiaalinen värjäysmenetelmä, jonka avulla voidaan erottaa grampositiiviset bakteerit (G+) gramnegatiivisista bakteereista (G-). Perusperiaate perustuu bakteerisolun seinämien erilaisiin kemiallisiin komponentteihin. Primäärivärjäyksen jälkeen kristallivioletilla ja peittauksella jodilla bakteerit muodostavat veteen liukenemattomia kristallivioletti-jodi-komplekseja soluseinään. Gram-positiivisilla bakteereilla on paksut soluseinät, ne eivät sisällä lipidejä, sisältävät runsaasti peptidoglykaania ja ovat ristisilloittuneita muodostaen tiiviin verkkorakenteen. Etanolilla käsiteltäessä peptidoglykaaniverkko kutistuu, mikä voi tukkia kristallivioletti-jodikompleksin. Se pysyy soluseinässä ja antaa sille kristallivioletin violetin värin. Gram-negatiivisilla bakteereilla taas on ohuet soluseinät, alhainen peptidoglykaanipitoisuus ja löysä silloittuminen. Etanolille altistuessaan lipidirikas ulkokalvo liukenee, soluseinämään muodostuu suuri rako ja kristallivioletti-jodikompleksi virtaa ulos, jolloin solut muuttuvat värittömiksi etanolin värinpoiston jälkeen. Tässä vaiheessa safraniinivastavärjäyksellä gramnegatiiviset bakteerit värjäytyvät punaisiksi.

Gram-värjäysliuos sisältää neljä komponenttia, nimittäin ammoniumoksalaattikristalliviolettivärjäysliuoksen, 1-prosenttisen jodiliuoksen, värinpoistoliuoksen ja fuksiinivärjäysliuoksen. Värjäyksen jälkeen grampositiiviset bakteerit näyttävät purppuranvärisiltä sinivioletilta ja gramnegatiiviset bakteerit punaisilta.

Varastointi ja kuljetus huoneenlämmössä; voimassa 12 kuukautta.

1. Poista vaha parafiiniosastosta veteen; kuivaa bakteerisävy luonnollisesti tai lämmitä sitä alkoholilampulla kuivuaksesi ja kiinnittääksesi sen.

2. Alkuvärjäys: Lisää kristalliviolettivärjäysliuosta tipoittain peittämään näyte 10-30 sekunnin ajan, pese vedellä ja linkoa.

3. Peittavärjäys: Lisää 1 % jodiliuosta tipoittain peittämään näyte 1-1,5 minuutin ajan, pese vedellä ja linkoa.

4. Värinpoisto: lisää tipoittain värinpoistoliuosta huuhdellaksesi kudoksen objektilasin toisesta päästä värinpoistoa varten, kunnes alas virtaava värinpoistoliuos ei enää näytä violetilta, ja pese välittömästi vedellä värinpoistoliuoksen poistamiseksi. Huolehdi poistumisajan hallinnasta.

5. Vastavärjäys: lisää Fuchsin-värjäysliuosta tipoittain 20-60 s ajan ja pese sitten vedellä. Pyyhi reunat suodatinpaperilla.

6. Bakteerinäytteitä voidaan tarkkailla suoraan mikroskoopilla. 60 °C:ssa kuivaamisen jälkeen kudosleikkeet kuivattiin nopeasti absoluuttisessa etanolissa kolme kertaa, 1 s, 3 s ja 5 s, vastaavasti. Sitten se läpinäkyväksi tehtiin ksyleenillä 5 minuutin ajan ja lopuksi suljettiin neutraalilla kumilla mikroskooppista tutkimusta varten.

1. Kiristä korkki ajoissa reagenssin käytön jälkeen estääksesi liuottimen haihtumisen.

2. Bakteerinäyte on liian paksu, kristalliviolettivärjäytysaika on liian pitkä ja värinpoisto on riittämätön, mikä voi johtaa vääriin positiivisiin tuloksiin. On suositeltavaa tehdä sekä negatiiviset että positiiviset bakteerikontrolliryhmät.

3. Jokaisella värjäysliuossarjalla voidaan värjätä noin 30 leikettä (pisaravärjäys).

4. Käytä laboratoriotakkia ja kertakäyttökäsineitä käytön aikana.

Vain tutkimuskäyttöön!

Suositut Tagit: gramman värjäyssarjat, kiina grammavärjäyssarjojen valmistajat, toimittajat, tehdas