T7 High Yield Transcription Kit

 

Tuotteen nimi	Cat.No.	Spec.
T7 High Yield Transcription Kit	G3021-50T	50 T

 

 

T7 High Yield Transcription Kit on täydellinen järjestelmä RNA:n tehokkaaseen synteesiin blot in situ -hybridisaatiokoettimiin, ribonukleaasisuojausmäärityksiin, transkription jälkeisiin modifikaatioihin, mukaan lukien RNA:n silmukointi ja polyadenylaatio, sekä in vitro -translaatioon. T7-RNA-polymeraasi on erittäin spesifinen omalle promoottorilleen ja kopioi suuria määriä RNA:ta DNA-sekvensseistä (esimerkiksi plasmideista, polymeraasiketjureaktion (PCR) fragmenteista tai synteettisestä DNA:sta) promoottoristaan ​​alavirtaan,

Reaktiojärjestelmässä 1 ug templaattisyöttöä voi tuottaa yli 100 ug RNA:ta, mikä sopii eripituisten RNA:n valmistukseen.

 

 

 

Laiva märällä jäällä; Säilytä -20 asteessa, voimassa 12 kuukautta.

 

 

Komponentin numero	Komponentti	G3021-50T
G3021-1	T7 RNA:n transkriptioentsyymisekoitus	200 μL
G3021-2	5 × T7 -transkriptioreaktiopuskuri	250 μL
G3021-3	25 mM NTP-sekoitus	100 μL
G3021-4	DNAaasi I	50 μL
G3021-5	Nukleaasiton vesi	1 ml
G3021-6	Kontrollimalli (0,5 ug/μL)	10 μL
Manuaalinen		Yksi kopio

 

 

1. Mallin valmistelu:

a. Plasmidi, joka sisältää T7-promoottorin: spesifisen pituisen RNA:n saamiseksi plasmidi tulisi linearisoida täysin ja puhdistaa templaattina. Plasmidin linealisoinnin restriktioentsyymillä pitäisi tuottaa 5'-uloke tai tylppä pää (vältä ulkonevaa 3'-päätä). Suositeltu templaatin määrä reaktiota kohden on ~1 ug;

b. PCR-tuote tai synteettinen DNA: T7-promoottorin sekvenssiin fuusioidun ei-koodaavan juosteen alukkeen 5'-pää (5'-TAATACGACTCACTATAGGG-3') suorittaa PCR-monistuksen. PCR-tuotteet voivat olla käytetään suoraan transkriptiotemplaatteina ilman puhdistusta, mutta RNA:n saanto kasvaa puhdistuksen jälkeen. Suositeltu mallin määrä reaktiota kohden on ~0,5 ug.

2. In vitro -translaatioreaktio:

a. Lisää seuraava komponentti steriiliin, nukleaasivapaaseen putkeen jäillä ilmoitetussa järjestyksessä

b. Sekoita varovasti ja sentrifugoi lyhyesti.

c. Inkuboi 37 asteessa 2 tuntia. (Säädä reaktioaika riippuen kohteen pituudesta ja halutusta RNA-saannosta. Esimerkiksi RNA:ta alle 300 nt, on suositeltavaa inkuboida 4 tuntia tai pidempään).

Komponentti	Määrä	Lopullinen kons.
Malli	0.5-1 ug	25-50 µg/ml
5 × T7 -transkriptioreaktiopuskuri	4 μL	1×
25 mM NTP-sekoitus	2 μL	2,5 mM
T7 RNA:n transkriptioentsyymisekoitus	4 μL
Nukleaasiton vesi	Jopa 20 μl	--

3. DNAaasi I -hoito

Lisää reaktion jälkeen 1 µl DNaasi I:tä, sekoita lyhyesti ja inkuboi 37 asteessa 15 minuuttia.

4. Transkriptiotuotteiden kvantifiointi

a. Geelielektroforeesianalyysi

1 % denaturoivaa formaldehydiagaroosigeeliä suositellaan.

b. UV-absorptiomenetelmä

UV-absorptiolaitteistolla määritetty RNA-tuotteiden pitoisuus puhdistuksen jälkeen (vapaat nukleotidit vaikuttavat kvantifioinnin tarkkuuteen).

 

 

1. Käytä asianmukaisia ​​käsineitä ja naamioita ja käytä kertakäyttöisiä RNaasi-vapaita kulutustarvikkeita RNaasi-kontaminaation estämiseksi.

2. Leimatun RNA:n valmistamiseksi vaihda pakkauksessa oleva NTP-seos sopivalla reagenssilla.

3. Pakkauksessa olevan kontrollitemplaatin transkription pituus oli 500 nt.

4. Turvallisuutesi ja terveytesi vuoksi käytä suojalaseja, käsineitä tai suojavaatetusta.

 

Vain tutkimuskäyttöön!

 

 

Suositut Tagit: t7 korkean tuoton transkriptiosarja, Kiina t7 korkean tuoton transkriptiosarjan valmistajat, toimittajat, tehdas