MagBind Bakteerigenomisen DNA:n uuttosarja

 

Tuotteen nimi	Kissa. Ei.	Spec.
MagBind Bakteerigenomisen DNA:n uuttosarja	G3603-50T	50 T

 

 

MagBind Bacterial Genomic DNA Extraction -pakkaus voi vapauttaa nopeasti bakteerien genomisen DNA:n erityisesti optimoidun bakteerien lyysipuskurijärjestelmän kautta. Yhdessä superparamagneettisten magneettihelmien kanssa, jotka yhtiömme on erityisesti kehittänyt nukleiinihappojen uuttamista varten, lysaatin genominen DNA adsorboituu selektiivisesti sidosliuoksen vaikutuksesta ja pieni määrä magneettihelmien adsorboimia epäpuhtauksia poistetaan huuhteluliuoksen puhdistaminen ja adsorboitunut genominen DNA vapautuu eluointiliuoksen vaikutuksesta. Tämä sarja sopii useille gramnegatiivisille bakteereille ja useimmille grampositiivisille bakteereille. Saatua erittäin puhdasta ja erittäin eheää genomista DNA:ta voidaan käyttää suoraan myöhempään PCR-monistukseen, Southern-hybridisaatioon, kirjaston valmistukseen ja muihin molekyylibiologisiin kokeisiin.

 

 

Lysotsyymi, proteinaasi K ja RNaasi A tulee kuljettaa märän jään kanssa ja varastoida -20 asteessa; Muut reagenssit toimitetaan ja säilytetään huoneenlämmössä enintään 12 kuukautta.

 

 

Komponentin numero	Komponentti	G3603-50T
G3603-1	Lysotsyymi	1 ml
G3603-2	Lysotsyymipuskuri	7 ml
G3603-3	Puskuri MB1	12 ml
G3603-4	Puskuri MB2	12 ml
G3603-5	Proteinaasi K	1 ml
G3603-6	RNaasi A	500 uL
G3603-7	SweMag helmiä	1 ml
G3603-8	Puskuri MBP	12 ml (18 ml vedetöntä etanolia lisättiin ennen käyttöä)
G3603-9	Puskuri PW	24 ml (56 ml vedetöntä etanolia lisättiin ennen käyttöä)
G3603-10	Puskuri TE	10 ml
Manuaalinen		Yksi kopio

 

 

1. Jos MB1-puskuria saostuu, liuotetaan se kuumentamalla 65 asteeseen ja käytä se sen jälkeen, kun se on palannut huoneenlämpöiseksi.

2. Lisää 18 ml vedetöntä etanolia puskuriin MBP ja 56 ml vedetöntä etanolia puskuriin PW ennen käyttöä.

3. Magneettitelineet vaaditaan, mutta ne eivät sisälly tähän sarjaan.

 

 

1. Sentrifugoi 1-5 ml yön yli tuoretta bakteeriviljelmää 12,000 rpm 1 minuutin ajan ja hävitä supernatantti.

Huomautus: Gram-positiivisille bakteereille tulee lisätä lysotsyymiliuosta soluseinän rikkomiseksi organismien keräämisen jälkeen. Spesifinen menetelmä on seuraava: lisää 130 µl lysotsyymipuskuria, 20 µl lysotsyymiä, vorteksoi ja ravista, kunnes bakteerit ovat täysin suspendoituneita, vesihaude 37 asteessa 60 minuutin ajan, sekoittaen 10 minuutin välein kääntämällä.

2. Lisää 200 μl puskuria MB1 sentrifugiputkeen ja sekoita vorteksoimalla.

3. Lisää sentrifugiputkeen 20 μl proteinaasi K:tä ja 10 μl RNaasi A:ta, sekoita hyvin pipetoimalla tai vorteksoimalla ja inkuboi sitten 56 asteessa 20 minuuttia, jolloin liuos näyttää kirkkaalta (jos liuos ei ole läpinäkyvä pidennä tässä vaiheessa inkubointiaikaa 30 minuuttiin ja sekoita kerran 10 minuutin välein).

4. lisää 200 uL puskuria MB2 ja 200 µl absoluuttista etanolia sentrifugiputkeen ja sekoita ylösalaisin, jolloin voi ilmestyä flokkuloiva sakka.

5. Lisää 20 μL SweMag Beads -suspensiota sentrifugiputkeen (SweMag Beads on suspendoitava kokonaan uudelleen ja jaettava tasaisesti ennen käyttöä). Puhalla pipetillä, kunnes magneettiset helmet jakautuvat tasaisesti.

6. Magneettisten helmien annettiin seistä huoneenlämmössä 10 minuuttia ja prosessin aikana magneettihelmiä puhallettiin ja sekoitettiin useita kertoja käyttäen pipettiä magneettihelmien pitämiseksi suspensiossa.

7. Aseta putki magneettitelineelle ja seiso 30 sekuntia. Kun supernatantti on kirkasta, ime ja hävitä supernatantti.

8. Lisää 500 µl MBP-puskuria, irrota magneettijalusta, pipetoi varovasti ylös ja alas, kunnes magneettiset helmet ovat dispergoituneet hyvin. Aseta putki magneettitelineelle 30 sekunniksi. Kun supernatantti on kirkasta, ime ja hävitä kirkas supernatantti.

9. Lisää 600 μl puskuria PW, irrota magneettiteline, pipetoi varovasti ylös ja alas, kunnes magneettihelmet ovat dispergoituneet hyvin. Aseta putki magneettitelineelle 30 sekunniksi. Kun supernatantti on kirkasta, ime ja hävitä kirkas supernatantti.

10. Toista vaihe 9.

11. Avaa sentrifugiputken kansi ja jätä se huoneenlämpöön 5-10 minuutiksi varmistaaksesi, että jäännösetanoli haihtuu kokonaan. (Älä anna niiden kuivua, jotta ne eivät vaikuta nukleiinihapposaantoon)

12. Irrota magneettijalusta, lisää 50–100 µl puskuri TE:tä tai nukleaasivapaata vettä ja pipetoi varovasti ylös ja alas magneettihelmien uudelleensuspendoimiseksi, seiso huoneenlämmössä 5 minuuttia.

13. Aseta putki magneettitelineelle, kunnes magneettihelmet ovat täysin adsorboituneet, ja ime sitten supernatantti uuteen nukleaasivapaaseen sentrifugiputkeen saadaksesi erittäin puhtaan genomisen DNA:n.

 

 

1. Muista lukea tämä tuoteopas huolellisesti ennen käyttöä.

2. Tuoreita organismeja olisi käytettävä mahdollisimman paljon uuttamalla saadun genomisen DNA:n saannon ja eheyden varmistamiseksi.

3. Uutetun bakteriofagin lähtömäärä ei saa koskaan olla liikaa ja sen tulee olla riittävästi hajotettua, muuten genomisen DNA:n saanto ja puhtaus voivat heikentyä.

4. Magneettiset helmisuspensiot tulee säilyttää jäätymisen estämiseksi.

5. Magneettiset helmet on helppo laskeutua, ja niitä tulee ravistaa hyvin ennen käyttöä, jotta ne pysyvät tasaisena suspensiona.

6. Ennen magneettihelmien lisäämistä muut reagenssit tulee sekoittaa hyvin.

7. Älä kuivaa magneettihelmiä pitkään, koska tämä voi vaikuttaa DNA:n eluutiotehoon.

 

Vain tutkimuskäyttöön!

 

 

Suositut Tagit: magbind-bakteerien genomisen dna:n uuttosarja, Kiina magbind-bakteerien genomisen dna:n uuttosarjan valmistajat, toimittajat, tehdas